|
|
Extrakce nukleotidů z rostlinné matrice a jejich stanovení iontově výměnnou vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií
Konečná, Markéta ; Sobotníková, Jana (vedoucí práce) ; Coufal, Pavel (oponent)
V této diplomové práci byly optimalizovány chromatografické podmínky pro HPLC analýzu ribonukleotidů AMP, ADP a ATP. Pro separaci byla využita chromatografická kolona Nucleogel SAX 1000-8, 50 x 4,6 mm, od německé firmy Marcherey-Nagel. Mobilní fázi tvořil roztok KH2PO4 o koncentraci 0,2 mol/L, jehož pH bylo upraveno 1mol/L hydroxidem draselným na hodnotu pH = 5,00. Jako nejvhodnější průtoková rychlost byl zvolen 1,0 mL/min. Analýza probíhala s využitím isokratické eluce. Detekce byla provedena DAD detektorem při vlnové délce λ = 260 nm. Látky byly eluovány v pořadí AMP (tr = 0,911 min), ADP (tr = 1,667 min) a ATP (tr = 7,262 min). Celková doba analýzy směsi standardů, za výše zmíněných podmínek, trvala 10 minut. Pro extrakci adenosin-5'-ribonukloetidů z reálné matrice byly použity mražené a lyofilizované listy tabáku virginského (Nicotiana tabacum L.). Byly využity dvě metody extrakce. První postup byl založen na extrakci AMP, ADP a ATP z listů rostliny tabáku vařící deionisovanou vodou. Druhá metoda využívala k extrakci, místo deionisované vody, 0,07mol/L HClO4. Klíčová slova: HPLC, adenosinové ribonukleotidy, AMP, ADP, ATP, tabák virginský
|
host ::
RSS.